Taq 처리에는 고온이 필요하며 일부 Taq은 초기부터 고온이 요구됩니다
대부분의 체외 증폭 응용은 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 열 안정성 중합효소를 사용합니다. 가장 많이 사용되는 PCR 효소는 Taq DNA 중합효소입니다. Taq DNA 중합효소는 70°C 이상의 온도에서 자라는 극호열성 유박테륨인 Thermus aquaticus에서 추출합니다. 이는 Taq DNA 중합효소의 최적 효소 활성이 약 72°C에서 발현된다는 뜻입니다.
일반 PCR과 hot-start 중 어느 것을 선택해야 하나요?
일반 Taq 중합효소는 72°C에서 최적 활성을 나타내지만 37°C부터 활성화되기 시작합니다. 저온 활성은 상당히 많으며 PCR 반응 초기 저온 단계 동안 비특이적 증폭과 프라이밍 오류(mis-priming) 현상이 발생할 수 있다는 단점이 있습니다. PCR 자동화가 필요한 경우, hot-start Taq 중합효소 사용을 고려하십시오.
Hot-start 중합효소는 일반 Taq과 다르게 상온에서는 활성화되지 않습니다. Hot-start PCR 기술은 기존 PCR과 같은 원리이지만 첫 번째 변성 단계가 완료될 때까지 효소 활성이 억제됩니다. 이렇게 하면 비특이적 결합과 프라이밍 오류가 최소화되고 특이성이 향상됩니다. 또한 이 기술은 실온에서 반응을 설정할 수 있는 상당한 편의성을 제공하여 PCR 자동화를 가능하게 합니다. 어떤 경우에는 비특이적 증폭이 특정 표적 증폭에 필요한 반응 성분을 고갈시키기 때문에 민감도조차 향상됩니다
모든 Taq 중합효소는 다음에 적합합니다.
표준 PCR 또는 자동화 및 고처리량 PCR 응용 분야에 적합한 hot-start 효소에 대한 요구 사항에 따라 Taq DNA 중합효소를 선택하십시오.
| 효소 | 특성 | 제공 품목 | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Hot-start (95°C에서 x분) |
앰플리콘 크기 | 연장 비율 | 5’-3’ exonuclease(엑소뉴클레아제) |
PCR buffer(완충액) | Loading buffer(로딩 완충액) | ||
| P7250L Taq-B (Taq) |
출시 예정 | ✘ 아니요 | <5kb |
72°C에서 2–4kb/분 |
✔ 예 | ✘ 아니요 | ✘ 아니요 |
| P7620L TaqIT *(Stoffel) |
출시 예정 | ✘ 아니요 | <7kb | 72°C에서 2–4kb/분 |
✘ 아니요* | ✔ 예 | ✘ 아니요 |
| 201203 Taq |
✘ 아니요 | <7kb | 72°C에서 2–4kb/분 |
✔ 예 | ✔ 예 + Q‑Solution | ✔ 예 | |
| 201223 Taq PCR Core Kit |
✘ 아니요 | <7kb |
72°C에서 2–4kb/분 |
✔ 예 | ✔ 예 + dNTPs | ✔ 예 | |
| 203123 AllTaq PCR Core Kit |
✔ 예(2분) | <9kb | 68°C에서 1분/kb |
✔ 예 | ✔ 예 + dNTPs | ✔ 예 | |
| 203203 HotStarTaq |
✔ 예(15분) | <7kb | 72°C에서 2–4kb/분 |
✔ 예 | ✔ 예 + Q‑Solution | ✘ 아니요 | |
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