实验和检测用酶试剂

T7 DNA 聚合酶本身具有低持续合成能力。它在掺入 <15 nt 后与引物–模板分离。感染 E. coli 后，T7 噬菌体附着至宿主蛋白硫氧还蛋白，作为其持续合成因子发挥作用。T7 DNA 聚合酶和硫氧还蛋白以一对一复合体形式结合，硫氧还蛋白与 T7 DNA 聚合酶的结合使聚合酶与引物–模板的特异性亲和力增加 80 倍。对引物–模板亲和力增加的结果是 T7 DNA 聚合酶能够将单链 DNA 上的引物延伸数千个核苷酸而不发生解离，从而允许连续合成长链 DNA。T7 DNA 聚合酶可用于通过去除残留的基因组 DNA 来纯化共价闭合环状 DNA 以及合成互补的 cDNA 链。 

另一个应用是通过标记双链 DNA 中存在的缺口来原位检测凋亡片段化 DNA。T7 DNA 聚合酶的高持续合成能力、强大的 3’→5’ 核酸外切酶活性以及耐受各种标记的三磷酸核苷的能力是应用于 DNA 损伤原位标记的最重要的特征。

体内彗星试验是一项符合 OECD 试验指南的既定遗传毒性试验。其标准形式能够检测 DNA 损伤，例如链断裂和碱不稳定性位点。通过在实验中包括额外的步骤，例如将 DNA 与损伤特异性酶一起孵育，可以提供关于 DNA 损伤的特定性质的重要信息。

修复实验的大多数应用都是在人体生物监测领域。人类每天都会接触到职业和环境中的致突变和致癌化合物。就职业接触而言，人们在一些工作中会接触到遗传毒性/致突变化合物，例如杀虫剂、染发剂、甲醛、抗肿瘤药物、有机溶剂等。

彗星试验技术基于单个拟核（细胞裂解和组蛋白剥离后附着在核基质上的 DNA）的电泳提供了彗星状图像，其尾部的强度取决于断裂的频率，而断裂可以放松超螺旋并允许包含断裂的 DNA 环发生迁移。使用损伤特异性核酸内切酶消化拟核可以允许检测不同的 DNA 损伤。

来自 E. coli 的 Endonuclease VIII (Endo VIII) 负责去除各种氧化损伤嘧啶碱基，包括胸腺嘧啶的辐射分解产物，例如胸腺嘧啶二醇和尿素。在彗星试验中使用这种酶来提示此类 DNA 损伤。Endo VIII 在碱基切除修复 (BER) 途径中发挥作用，并催化 N-糖苷键的水解（N-糖苷酶活性）。作为其结果，形成了修饰的游离碱和无嘌呤/无嘧啶 (AP) 位点。通过 β, δ-消除（AP 裂解酶活性）进行随后的 AP 位点剪切，并产生单链 DNA 断裂。该试验能够检测到断裂并确定病变。

使用 Endo VIII 进行的 DNase I 足迹法分析能够显示蛋白质与 DNA 的结合，其接触位点主要位于含损伤的链上。