酶法清理 | 去除不需要的残留物和人为产物

好管家会打磨和修剪

残留的试剂和反应物会阻碍下游过程。在进行下一步之前，首先使用正确的酶制剂清理样本。使用一些不算秘密的添加剂来加速并增强扩增和转录。

用于剪切和清除残留试剂的酶试剂

在进行 SNP 分析、新一代测序、Sanger DNA 测序或其他下游分析之前，使用 Exonuclease I、DNase I、RNase A 和蛋白酶对 DNA 样本进行酶法清理 以去除残留的引物、核苷酸和酶。

TAGZyme DAPase 酶 和 TAGZyme 系统用于从含有固有 DAPase 终止点的蛋白质（使用 TAGZyme pQE-2 载体表达）或含有工程化谷氨酰胺终止点的蛋白质中去除 His 标签。

酶试剂		活性	应用
X8010L Exonuclease I	即将推出	Exonuclease I 以 3’→5’ 方向剪切单链 DNA，释放 5’-单核苷酸/二核苷酸，并保留双链 DNA 分子和 5’-末端完整；通过 3’-端磷酸盐的存在抑制消化	在进行 SNP 分析或 Sanger DNA 测序前去除 PCR 反应体系中的单链引物去除巢式 PCR 反应体系中的单链引物去除线性单链 DNA，保留样本中的双链 DNA
79254 RNase-free DNase (1500 Kunitz units)		非特异性剪切 DNA 以释放带有 5’-磷酸化和 3’-羟基化末端的二核苷酸、三核苷酸和寡核苷酸产物的核酸内切酶；作用于 ssDNA 和 dsDNA、染色质以及 RNA:DNA 杂合体	在进行 RNA 清理和浓缩之前去除 RNA 溶液中的污染 DNA 去除蛋白质样本中的 DNA 制造 DNA 刻痕作为将标记的碱基掺入 DNA 的第一步 DNA-蛋白质相互作用分析（足迹法检测）
19101 RNase A		在 C 和 U 残基处降解 ssRNA 的核糖核酸内切酶	去除质粒和基因组 DNA 制剂中的污染 RNA 去除重组蛋白制剂中的 RNA 绘制 DNA 或 RNA 中的单碱基突变（RNase 保护实验）
19131 Proteinase K		QIAGEN Proteinase K 是一种从腐生真菌 Tritirachium album 中分离出的枯草杆菌蛋白酶型蛋白酶	在 DNA 和 RNA 分离过程中进行蛋白酶消化 Proteinase K 具有较高的比活性；在广泛的温度和 pH 值范围内保持稳定；不被 EDTA 抑制；适用于较短的消化时间
19155 Protease		QIAGEN Protease 是从重组芽孢杆菌菌株分离出的丝氨酸蛋白酶；Proteinase K 的经济替代品	在多种来源的天然 DNA 和 RNA 分离物中进行蛋白酶消化
34362 TAGzyme DAPase Enyzme		TAGZyme DAPase（重组二肽基肽酶 I）	从 N-末端 His 标签中顺序去除二肽，直到使用 TAGZyme pQE 载体表达的“终止点” 生产无 His 标签蛋白用于：蛋白质结构测定治疗性蛋白质

提高产率

在扩增和测序反应中使用 DNA 结合蛋白可以提高模板的产率和质量。作为 DNA 结合蛋白，来自 T4 噬菌体的基因 32 编码蛋白 (T4gp32) 可以使用多种不同的模板提高 PCR 扩增效率。此外，在 DNA 测序反应中使用 E. coli 单链 DNA 结合蛋白 (SSB) 可以提高测序运行的分辨率。

通过使用无机焦磷酸酶（RNA 制备反应体系中的一种重要组分）处理可以提高体外转录速率。这种酶将焦磷酸盐分解成两个磷酸盐分子，防止焦磷酸盐与镁发生沉淀。

试剂		活性	应用
Y9030L E. coli ssDNA Binding Protein	即将推出	以高度特异性与单链 DNA 结合；耐热	有助于引物隔离有助于增强 PCR 的特异性有助于对有问题的 DNA 模板进行测序
Y9130L T4 Gene 32 Protein	即将推出	稳定 ssDNA 区域	提高某些 DNA 聚合酶的持续合成能力
Y9380L E. coli pyrophosphatase	即将推出	一种催化无机焦磷酸盐水解形成正磷酸盐的无机焦磷酸酶*	提高转录反应中的 RNA 产率增强 DNA 复制
Y9370L Thermostable pyrophosphatase	即将推出	耐热焦磷酸化酶是一种来自 Sulfolobus acidocaldarius 的重组酶，可以催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐†	有助于增强 PCR 中的 DNA 复制

UDG 链剪切

UDG 介导的链剪切是分子生物技术领域的一种重要工具，允许通过脱氧尿苷的单次或多次掺入实现对化学或酶法合成的单链和双链 DNA 的受控和位点特异性剪切。

消除 PCR “遗留”污染

在初级反应中使用 dUTP 代替 dTTP 使 PCR 产物易于降解时，热不稳定性 UDG 能够消除 PCR “残留”。

在尿嘧啶残基处产生缺口

10x Uracil Cleavage System 酶混合物可在脱氧尿苷残基的特定位点产生单核苷酸缺口。

在 NGS 之前去除人为产物

UDG 处理能够从 FFPE 肿瘤组织中去除尿嘧啶（脱氨基胞嘧啶）人为产物，并在进行新一代测序之前减少古 DNA 中的人为产物。

UDG 处理可以减少测序人为产物，消除 PCR 残留，并在 DNA 中产生特定缺口。

酶试剂		活性	应用
19160, G5010L Uracil DNA Glycosylase (UDG) G5020L Thermolabile UDG	即将推出	尿嘧啶 DNA 糖苷酶 (UDG) 参与碱基切除修复； UDG 在含尿嘧啶的 DNA 中产生无碱基位点；降解含尿嘧啶的 DNA	在通过新一代测序和其他方法进行突变检测过程中使用 UDG 进行 DNA 预处理可以减少 DNA 人为产物，而不会影响检测真实突变的能力去除 FFPE 制剂中的尿嘧啶（脱氨基胞嘧啶）人为产物在初级 PCR 反应混合物中用 dUTP 代替 dTTP 时，热不稳定性 UDG 可用于消除 PCR “残留”污染
Y9180L 10X Uracil Cleavage System	即将推出	该系统由两种酶组分组成——Uracil DNA Glycosylase 和 Endonuclease VIII。当这些酶依次加入到合成 DNA 片段含有脱氧尿嘧啶的反应体系中时，尿嘧啶残基位点会产生一个单核苷酸缺口	在体外酶促产生尿嘧啶核苷酸缺口 UDG 是一种不会从 RNA 底物中切除尿嘧啶的 DNA 特异性酶。脱氧尿苷核苷酸靶向掺入寡核苷酸可与该酶系统一起用于从 DNA:RNA 杂合体中特异性剪切 DNA 片段或 DNA 模板。
Y9080L Endonuclease VIII	即将推出	Endonuclease VIII 作为 N-糖苷酶（通过切除氧化性碱基损伤）和 AP 裂解酶（通过随后剪切磷酸二酯主链）发挥作用，在 5’ 和 3’ 端留下末端磷酸盐；参与氧化产生的 DNA 损伤的碱基切除修复	切除双链 DNA 中的受损嘧啶用于通过单细胞凝胶电泳（彗星试验）测量 DNA 损伤

酶试剂

活性

应用

19160, G5010L
Uracil DNA
Glycosylase (UDG)

G5020L
Thermolabile UDG

即将推出

尿嘧啶 DNA 糖苷酶 (UDG) 参与碱基切除修复；
UDG 在含尿嘧啶的 DNA 中产生无碱基位点；
降解含尿嘧啶的 DNA

在通过新一代测序和其他方法进行突变检测过程中使用
UDG 进行 DNA 预处理可以减少 DNA 人为产物，
而不会影响检测真实突变的能力
去除 FFPE 制剂中的尿嘧啶（脱氨基胞嘧啶）
人为产物
在初级 PCR 反应混合物中用 dUTP 代替
dTTP 时，热不稳定性 UDG 可用于消除
PCR “残留”污染

Y9180L
10X Uracil Cleavage
System

即将推出

该系统由两种酶组分组成——Uracil DNA
Glycosylase 和 Endonuclease VIII。当这些酶
依次加入到合成 DNA 片段含有脱氧尿嘧啶的
反应体系中时，尿嘧啶残基位点
会产生一个单核苷酸缺口

在体外酶促产生尿嘧啶核苷酸缺口
UDG 是一种不会从 RNA 底物中切除尿嘧啶的
DNA 特异性酶。脱氧尿苷核苷酸
靶向掺入寡核苷酸可与该酶系统一起用于
从 DNA:RNA 杂合体中特异性剪切 DNA 片段
或 DNA 模板。

Y9080L
Endonuclease VIII

即将推出

Endonuclease VIII 作为 N-糖苷酶（通过
切除氧化性碱基损伤）和 AP 裂解酶（通过
随后剪切磷酸二酯主链）发挥作用，在 5’ 和 3’ 端
留下末端磷酸盐；参与氧化产生的 DNA
损伤的碱基切除修复

切除双链 DNA 中的受损嘧啶
用于通过单细胞凝胶电泳
（彗星试验）测量 DNA 损伤

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减少人为产物和反应清理常见问答

尿嘧啶 DNA 糖苷酶识别尿嘧啶碱基，然后通过剪切 N-糖苷键消除 DNA 中的尿嘧啶；这导致无碱基位点（AP 位点）形成。在体内，UDG 保持与 AP 位点结合，直到被对无碱基位点具有更高亲和力的特异性核酸内切酶取代。此类酶，例如 Endonuclease VIII 或 Endonuclease III，具有 AP 裂解酶活性，其催化 AP 位点的磷酸二酯主链 3’ 和/或 5’ 的裂解，释放出无碱基脱氧核糖，从而形成单核苷酸缺口。

单链 DNA 结合蛋白 (SSB) 优先结合单链 DNA，形成四个相同 18.9 kDa 亚基组成的四聚体，其能够保护 8-16 核苷酸，但不能很好地结合双链 DNA。在自然界中，SSB 参与 DNA 复制以及重组和修复功能。在体外，已经发现 SSB 通过松解 DNA 二级结构和增强酶持续合成能力来刺激某些 DNA 聚合酶介导的反应。

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